Коррекция антиоксидантами нарушений гемостаза при оперативном лечении миомы матки


Таблица 1 Распределение обследованных женщин по группам



страница4/13
Дата18.05.2019
Размер2 Mb.
ТипДиссертация
1   2   3   4   5   6   7   8   9   ...   13

Таблица 1

Распределение обследованных женщин по группам


Группы

n

I. Здоровые доноры во II фазе менструального цикла

20

II. Больные миомой, перенесшие консервативную миомэктомию, из них:

  • группа сравнения (традиционное лечение)

  • основная группа (дополнительно селмевит)

79
49

30


III. Больные миомой, после удаление матки путем чревосечения, из них:

  • группа сравнения (традиционное лечение)

  • основная группа (дополнительно селмевит)

136
76

60


IV. Больные миомой после удаление матки лапароскопическим доступом, из них:

  • группа сравнения (традиционное лечение)

- основная группа (дополнительно селмевит)

19

10

9


Всего

254

В каждой группе часть женщин получала традиционную предоперационную подготовку и послеоперационное лечение (группа сравнения), а другая часть женщин (основная группа) дополнительно принимала селмевит – препарат с высокой антиоксидантной активностью [Ю.Ф.Удалов и др., 1997, 2000] (табл. 1).

Традиционная терапия до операции включала гормональные (гестагенные и эстогенные), утеротонические, антианемические, седативные, лекарственные средства; в послеоперационном периоде традиционная терапия состояла из обезболивающих, десенсибилизирующих, стимулирующих перестальтику кишечника, нестероидных противовоспалительных, препаратов железа, инфузионных плазмозамещающих растворов, никотиновой кислоты, при наличии хронических воспалительных заболеваний органов малого таза и мочевыделительной системы – антибактериальные препараты широкого спектра действия.

Селмевит назначали по одному драже в день за 14 сут до операции и на протяжении 14 сут в послеоперационном периоде.

На каждую женщину заполняли специальную статистическую карту, содержащую пункты, отражающие возраст, социальное положение, акушерско-гинекологический анамнез, перенесенные соматические заболевания, особенности течения настоящей беременности, течение операции и послеоперационного периода, результаты клинико-лабораторных исследований.

3.2. Методы клинико-лабораторных исследований

Все лабораторные исследования крови у наблюдавшихся женщин проводили в специализированной лаборатории кафедры акушерства и гинекологии ГОУ ВПО ТюмГМА. Кровь забирали из локтевой вены в три пластиковые пробирки: для оценки количества и морфофункциональных особенностей тромбоцитов – 4 мл, для исследования коагуляционного гемостаза – 4,5 мл, для определения состояния перекисного окисления липидов и антиоксидантной активности – 4,5 мл. Отбор проб проводили в соответствие с требованиями гемостазиологии [В.П. Балуда и др., 1980].

Клиническое и лабораторное обследование проводили до операции и через сутки после неё, а также на 3-4 и 5-7 сут послеоперационного периода.

Клиническое обследование включало изучение жалоб, анамнеза заболевания, анамнеза жизни, гинекологического и акушерского анамнеза; общий осмотр и специальное гинекологическое обследование, бактериоскопию отделяемого цервикального канала, влагалища и уретры; ультразвуковое исследование органов малого таза.

Анализируя течение операции у больных миомой матки, учитывали продолжительность операции, введение лекарственных препаратов, показатели артериального давления, пульса, частоту дыхания, температуру тела, вид анестезии, объем кровопотери гравиметрическим методом [М.А. Репина, 1986]. В послеоперационном периоде оценивали наличие и частоту осложнений, общую продолжительность пребывания в стационаре и количество послеоперационных койко-дней.

В соответствии с задачами работы у женщин всех групп определяли количество, морфологию и агрегацию тромбоцитов, показатели состояния свер­тывающей, противосвертывающей, фибринолитической систем и показатели интенсивности ПОЛ в крови.



3.2.1. Методы оценки тромбоцитарного звена гемостаза

  1. Количество тромбоцитов определяли унифицированным методом - подсчет в камере Горяева с использованием фазово-контраст­ной микроскопии [В.В. Меньшиков и др., 1987]. Пределы колебания числа тромбоцитов у здоровых людей 150109/л – 450109/л.

  2. Морфологическая оценка спонтанного изменения формы тромбоцитов в стабилизированной крови А.С. Шитикова и соавт., 1996. Форма тромбоцита и ее изменения – отражают функциональное состояние клетки.

Спонтанную активацию тромбоцитов вызывали контактной стимуляцией, осуществляющейся в процессе извлечения из локтевой вены и получения цитратной плазмы. Стандартность активации обеспечивали немедленным после забора крови последовательным выполнением всех операций. Кровь, набранную в пластиковую пробирку, стабилизировали 3,8% раствором цитрата натрия в соотношении 1:5, центрифугировали 10 мин при 200 оборотах в минуту, затем отделяли плазму и фиксировали её (смешивали 0,5 мл плазмы с 2 мл 0,125% раствора глутаральдегида). После пятикратного перемешивания пипеткой заполняли камеру Горяева, которую на 20 мин помещали в увлажненную чашку Петри. Оценку распределения различных форм тромбоцитов производили, используя фазово-контрасную микроскопию с увеличением в 1200 раз. Одновременно под малым увеличением (300х) определяли число тромбоцитарных агрегатов разных размеров (в пересчете на 100 свободных клеток) и количество агрегатообразующих тромбоцитов (на 500 свободных клеток).

Оценивали:



а) формы тромбоцитов:

    • дискоциты /Д/, имеющие вид веретена с четкими темными контурами, без отростков, соотношение ширины к длине (ш/д) от 0,3 до 0,5;

    • дискоэхиноциты /ДЭ/, отличающиеся от дискоцитов наличием единичных и коротких отростков;

    • сфероэхиноциты /СЭ/, округлые клетки с темными четкими контурами, имеющие большое число преимущественно длинных отростков, ш/д – от 0,6 до 1,0;

    • сфероциты /С/, отличающиеся от СЭ отсутствием отростков;

    • суммарное количество активированных форм тромбоцитов (ДЭ+СЭ+С);

б) число агрегатообразующих или вовлеченных в агрегаты тромбоцитов (на 500 свободных клеток);

в) число малых агрегатов по 2-3 тромбоцита в перерасчете на 100 свободных клеток;

г) число больших агрегатов по 4 и более тромбоцитов в перерасчете на 100 свободных клеток.

3.2.2. Методы исследования коагуляционного гемостаза


  1. Активированное время рекальцификации /АВР/.

  2. Активированное частичное тромбопластиновое время /АЧТВ/ выражали в секундах, сравнивая время свертывания нормальной (контрольной) и исследуемой плазмы. Оба теста проводили по Г.Н. Детинкиной и др. [1984 а, б].

  3. Протромбиновое время /ПТВ/ определяли для каждой партии тромбопластина [З.С. Баркаган, А.П. Момот, 1999]. Результат выражали следующим образом:

а) указывали ПТВ в секундах с указанием контрольных значений, полученных при исследовании нормальной плазмы;

б) рассчитывали протромбиновое отношение /ПО/, выражая его в единицах, по формуле:



ПО = (ПВ больного/ПВ контрольной нормальной плазмы),

затем, для учета международного индекса чувствительности (МИЧ) тромбопластина, возводили ПО в степень МИЧ или ISI, указанную фирмой-изготовителем тромбопластина) и таким образом рассчитывали международное нормализованное отношение (МНО или INR). МИЧ на маркировке тромбопластина характеризует степень чувствительности тромбопластина к дефициту факторов протромбинового комплекса (прежде всего – VII) – его использование сводит к минимуму разнородность результатов определений ПТВ при использовании разных тромбопластинов.



  1. Концентрацию фибриногена /ФГ/ определяли гравиметрически [Р.А. Рут­берг, 1961].

  2. Определяли растворимые фибрин-мономерные комплексы /РФМК/ с помощью количественного варианта фенантролинового теста. Тест считали положительным, если в плазме в первые 150 с заметны хорошо видимые в проходящем свете хлопья или зерна паракоагулята. Отмечали время его появления в секундах и по таблице определяли количество РФМК в исследуемой плазме [А.П. Момот, В.А. Елыкомов, З.С. Баркаган, 1996].

  3. Определение продуктов деградации фибрина /ПДФ/ проводили по Nanniga Guest [1967].

  4. Для оценки противосвертывающего потенциала определяли активность антитромбина III /АТ III/, выражая в процентах (принцип Abildgaard e.a.) [З.С. Баркаган, А.П. Момот, 1999]. Активность АТ III определяли по способности исследуемой плазмы инактивировать тромбин, для чего ее обрабатывали сорбентом гепарина, подвергали тепловой дефибринации и смешивали со стандартным количеством тромбина. После инкубации смеси в ней определяли остаточную коагуляционную активность тромбина. По уровню снижения активности тромбина оценивали активность АТ III в исследуемой плазме с помощью калибровочной кривой.

  5. Индекс резерва плазминогена /ИРП/ исследовали для оценки активности фибринолитической системы: определяли время эуглобулинового лизиса, активированного стрептокиназой и сопоставляли его со средним временем лизиса эуглобулинов, полученных из контрольных образцов плазмы здоровых людей. Для расчета использовали формулу:

ИРП,% = ЛИСк/ЛИСи100,

Где ЛИСк – среднее время лизиса эуглобулинов в контроле, ЛИСи – то же в исследуемом образце.

Для определения вышеперечисленных показателей были использованы реактивы фирмы «Технология-Стандарт», г. Барнаул.

9. Фактор 3 тромбоцитов /Р3/ определяли по методике Rabiner S.F и Hrodek.O. [1968].




3.2.3. Методы оценки состояния перекисного окисления липидов и антиоксидантной активности крови

Состояние перекисного окисления липидов и антиоксидантный потенциал устанавливали с помощью методик, включающих определение содержания первичных (диеновых коньюгатов /ДК/) и вторичных (малонового диальдегида /МДА/) продуктов ПОЛ. Антиоксидантый потенциал оценивали по содержанию в эритроцитах витамина Е.

1. Для определения диеновых конъюгат сухой липидный экстракт растворяли в 4 мл смеси гептан-изопропанол в соотношении 1/1, перемешивали встряхиванием. Раствор замеряли на спектрофотометре с длиной волны – 232 нм, против смеси растворителя в кюветах – 1 см.

Расчет (для экстракта из 0,2 мл материала) выполняли по формуле:



А х 90,9 = нмоль/мл,

где А – значение, полученное при спектрофотометрии [И.Д. Стальная, И.Г. Горишвили, 1977 а, б].

Расчет для экстракта из 0,1 мл эритроцитов выполняли по формуле:

А х 181,8 = нмоль/мл

2. Для определения малонового диальдегида (ТБК-зависимый продукт) к сухому липидному экстракту добавляли 2 мл 17% трихлоруксусной кислоты /ТХУ/ и 1 мл 0,8% тиобарбитуровой кислоты. Полученный раствор нагревали 20 мин на кипящей водяной бане. После охлаждения доводили объем до 3 мл и центрифугировали 10 мин при 3000 об/мин. Оптическую плотность супернатанта определяли спектрофотометрически (длина волны – 532 нм), против контроля, который ставят вместе с пробами (2мл ТХУ + 1 мл тиобарбитуровой кислоты).

Расчет (для экстракта из 0,2 мл материала) выполняли по формуле:

А х 128 = нмоль/мл,

где А – значение, полученное при спектрофотометрии [И.Д. Стальная, И.Г. Горишвили, 1977 а, б].

3. Для определения содержания токоферола к липидному экстракту, полученному из 0,2 мл исследуемого материала, добавляли 2,5 мл этилового спирта, растворяли, затем в каждую пробу добавляли 0,2 мл 0,2% раствора дипиридила и 0,2 мл 0,2% р-ра хлорного железа (шестиводного). Полученный раствор тщательно перемешивали встряхиванием и замеряли через 10 минут на спектрофотометре (длина волны - 532 нм) против контроля. Для получения контрольного раствора использовали этиловый спирт, растворы дипиридила и хлорного железа в тех же объемах.

Расчет для экстракта из 0,2 мл материала производился по формуле:



Ао х 23,2 = мкмоль/л = нмоль/мл,

где Ао – значение, полученное при спектрофотометрии [Н.К. Рудакова-Шилина, Л.Д. Матюкова, 1982].

Расчет для экстракта из 0,1 мл эритроцитов, плазмы выполнялся по формуле:

Ао х 46,4 = мкмоль/л = нмоль/мл .

Полученные результаты подвергали математической обработке методом вариационной статистики для малых рядов наблюдений с вычислением средней арифметической (М), средней ошибки средней арифметической (m), среднеквадратического отклонения (σ). Для определения достоверности отличий вычисляли доверительный коэффициент Стъюдента (t) и величину вероятности (р). Различия оценивали как достоверные при значениях величины вероятности ≤ 0,05.

В работе использован отечественный препарат “Селмевит” - комплекс витаминов и минералов, восполняющий дефицит витаминов и минералов, содержащий антиоксиданты, нормализующий липидный обмен. Изготовитель ОАО «УфаВИТА» (г. Уфа).

В связи со сравнительно непродолжительным использованием селмевита приводим его состав:

Состав препарата “Селмевит” (на 1 таблетку)

Витамин А (ретинола ацетет) – 0,5 мг

Витамин В1 (тиамина бромид) – 0,75 мг

Витамин В6 (пиридоксина гидрохлорид) – 2,5 мг

Витамин В12 (цианкобаламин) – 0,0003 мг

Витамин С (аскорбиновая кислота) – 35,0 мг

Витамин Е (-токоферола ацетат) – 7,5 мг

Витамин Р (рутин) – 12,5 мг

Витамин РР (никотинамид) – 4,0 мг

Витамин В15 (пантотенат кальция) – 2,5 мг

Витамин Вс (фолиевая кислота) – 0,0005 г

Железо (двухвалентное) – 0,0025 г

Медь (двухвалентная) – 0,0004 г

Кальций –0,025г

Кобальт –0,0005 г

Марганец – 0,000125 г

Цинк – 0,002 г

Магний – 0,025 г

Селен – 25 мкг

Фосфор (пятивалентный) – 0,03 г

Метионин –0,1г

Липоевая кислота – 0,001г






Поделитесь с Вашими друзьями:
1   2   3   4   5   6   7   8   9   ...   13


База данных защищена авторским правом ©vossta.ru 2019
обратиться к администрации

    Главная страница